Western快速封闭液

          Rapid Blocking Buffer for WB      Ver760767-2.0

● 产品简介：

本产品是一种专为 Western Blot（WB）转印膜快速封闭而设计的即用型封闭液，含牛血清白蛋白（BSA）及多种高效封闭成分。通过快速覆盖转印膜表面的非特异性结合位点，可有效减少抗体在膜上的非特异吸附，降低检测背景，提高目的条带的信噪比。

本产品不含酪蛋白等内源性磷酸化蛋白，适用于磷酸化蛋白及磷酸化特异性抗体的 Western Blot 检测；同时不含生物素，可用于生物素—亲和素检测体系。

优化的快速封闭配方可在较短时间内完成 PVDF 膜或NC 膜的封闭，在有效降低背景的同时，尽可能减少封闭剂对膜上目的蛋白抗体识别的影响，保持良好的检测灵敏度。

不同抗原、抗体、转印膜及检测体系之间存在差异，目前尚无一种封闭剂能够适用于所有 Western Blot 实验。对于首次使用的抗体，建议根据实验结果对封闭时间、抗体稀释比例及洗膜条件进行适当优化。如使用本产品后出现目的条带减弱、背景偏高或非特异性条带增加，可适当调整封闭时间，或更换脱脂奶粉、BSA、酪蛋白等其他类型的封闭剂进行比较。

本产品含有 BSA，不适用于要求完全无蛋白封闭的检测体系。对于抗牛血清白蛋白（BSA）抗体或可能与牛源蛋白发生交叉反应的实验，应谨慎使用。

为达到更好的封闭效果，本产品建议一次性使用；经实验验证封闭性能未明显下降且无污染时，可酌情重复使用。

按照每次使用10 ml封闭液计算，该产品可以使用50次检测。

● 贮存、效期及运输：

  2-8℃贮存；有效期一年；常温运输。

● 使用说明：

1. 本产品无需稀释，开盖即用。

2. 完成转膜后，使用1×TBST漂洗转印膜3次，每次5分钟；

3. 将转印膜放入到孵育盒中，加入10-20 ml快速封闭液完全覆盖转印膜，置于摇床轻轻摇动，参考下表确定封闭时间：

注意：使用本产品，PVDF膜和NC膜使用推荐封闭时间，经多种抗体的测试封闭效果显著优于常规的BSA封闭1 h。对于一些背景非常高的抗体，可以尝试延长封闭时间30-60分钟。如有特殊需要，也可4℃封闭过夜。

4.  封闭结束后弃去封闭液，进行Western Blot后续操作。

● 实验示例：

Jurkat细胞总蛋白GAPDH检测

凝胶：12%T3.3C SDS-PAGE（Cat:RTD6132-12）

电泳条件：200 V 1×TGS 40-12 mA 53 min

转膜条件：NC膜，1×RealBlot快速转膜液(Cat:RT5020) ，恒流400 mA 35 min 65-59 V

封闭：快速封闭液（Cat：WR5020） RT 10 min

一抗：兔GAPDH多抗(Cat: RGA1040) 1:2000 过夜4℃孵育

二抗：羊抗兔IgG-HRP(Cat: RGA1040) 1:5000  RT 60min

ECL发光：RealECL发光液（Cat:EC2520 ） 10秒曝光