TMB显色液(沉淀型，膜HRP显色用)
TMB Color Development Solution for Western Blot
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货号
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产品名称
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包装
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TM1025
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TMB显色液(沉淀型，膜HRP显色用)
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20次
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● 产品简介：
TMB，即 3, 3′,5 ,5′-Tetramethylbenzidine，是辣根过氧化物酶（HRP）的常用底物。在辣根过氧化物酶催化下，TMB 会产生蓝色产物。本显色液具有高灵敏性，与HRP反应后产生蓝紫色沉淀，沉淀吸附于印迹膜上，不会脱落，方便显色结果的保存和观察。
本试剂盒主要适用于印迹法如Western Blot（WB）中HRP的膜显色检测。由于产生的是沉淀型蓝色产物，不适用于ELISA检测。
用于WB膜的显色检测，如果每次使用5 ml显色液，则可以检测20次。
● 产品组成：
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组份
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产品名称
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规格
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TM1025-01
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显色缓冲液（2×）
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50 ml
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TM1025-02
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显色底物（40×）
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2.5 ml
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-
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说明书
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一份
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● 贮存、运输 及效期：
2-8℃避光保存；常温运输；有效期一年。
● 使用说明：
一. 即用型TMB显色液配制：
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配制顺序
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组份
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5 ml 配制量
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10 ml配制量
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1
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显色缓冲液（2×）
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2.5 ml
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5 ml
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2
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超纯水
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2.375 ml
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4.75 ml
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3
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显色底物（40×）
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0.125 ml
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0.25 ml
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注：即用型显色液推荐现用现配
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二. 膜的HRP显色检测：
1. 参考相应的实验步骤，在与HRP标记的抗体孵育后，用适当洗涤液洗涤3-5次，每次5分钟。
2. 洗涤完毕后，去除洗涤液，
3. 滴加适量即用型TMB显色液充分覆盖膜。
4. 常温避光孵育3-30分钟，直至显色至预期深浅。
5. 直接拍照记录。
● 常见问题：
一. 背景显色太深。
1. 如果背景显色太深，一方面需考虑使用适当的封闭液进行封闭，例如选购适当的封闭液或使用和一抗相同来源的血清(10%)进行封闭。另一方面，请选购经过适当吸附的二抗，以减小二抗的非特异性吸附。
2. 可以考虑缩短显色时间，或降低二抗浓度。另外，选择适当强度的洗涤液，或延长洗涤时间也会有所帮助。
二. 没有显色或显色太弱。
1. 适当提高一抗或二抗的浓度。在离心管内用稀释的二抗与染色液反应，检测二抗是否可以被正常显色。
2. 可以考虑使用更加灵敏的放大检测体系，例如使用生物素检测体系。
3. 可以适当延长显色时间。
4. 如果上述改进不能获得预期效果，对于Western，可以考虑更换效果更好的一抗。
实验示例：
样品：K562细胞,SDS裂解液(Cat:RL1060)提取总蛋白；
电泳：4-20%RealPAGE Tris-Glycine预制胶(Cat:RTD6117-0420)
转膜：RealBlot快速转膜液(Cat:RT5020),0.45μmPVDF膜，400 mA 30 min
封闭：Western封闭液I（BSA）（Cat：WB1070）常温封闭60min
一抗：Anti-PCNA抗体（鼠单抗）（Cat：APM5012） 1:5000 RT 60min；
二抗：HRP标记羊抗鼠IgG（Cat：HGM1060） 1:5000 RT 60min；
显色：TMB显色液(沉淀型，组化或膜HRP显色用)（Cat：TM1026），显色1分钟
使用TMB显色液发表部分文章列表：
1. [2022 IF=9.22] A HCR based multivalent aptamer
amplifier for ultrasensitive detection of Salmonella.
Author: Mengni Sun, Na Ma, Hanxing Shi,
Ling-Zhi Cheong, Wenge Yang, Zhaohui Qiao
Product: TM1026 TMB显色液(沉淀型，组化或膜HRP显色用)
Journal: Sensors
and Actuators:B.Chemical 2023,375,132860
Institution：College of Food and Pharmaceutical Sciences,
Ningbo University
Paper link：https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0925400522015039
2. [2023 IF=4.8] Sensitive lateral flow immunoassay
enabled by signal amplification strategy with high active oxidase-like
nanozymes.
Author: Jie Zhu, Yunhui Cheng, Xufeng Wang,
Hao Wu, Ye Jiao, Keyu Xing, Li Yao，Pei Jia，Zhou
Xu
Product: TM1026 TMB显色液(沉淀型，组化或膜HRP显色用)
Journal: Food Bioscience Accepted Date: 27
March 2025
Institution：Changsha University of Science &
Technology
Paper link：https://doi.org/10.1016/j.fbio.2025.106470