单链DNA PAGE电泳染色试剂盒    Ver.760359-2.0

● 产品简介                                                                                  

单链DNA PAGE电泳染色试剂盒(ssDNA PAGE Stain Kit for Nucleic Acids)是一种快速简单、可用于尿素-聚丙烯酰胺凝胶中的核酸检测的试剂盒。采用新型染色剂，电泳结束后可以直接染色凝胶，不用借助任何成像仪器，既能观察核酸条带。该染色方法能检测到高于100 ng含量的ssDNA条带，常用于检测 SSR 标记、SNP 标记等，如果需要更高灵敏度检测，可以选择核酸染料如RealSafe Gold核酸染色剂（货号：GR003）。

按照每次使用50 ml染色液计算，本试剂盒可用于18-20块常规的8×10 cm凝胶的染色。

● 产品组成：

● 储存条件

常温保存；常温运输；有效期一年。

● 使用方法：

一. 即用型染色液配制：

在125 ml棕色塑料瓶中依次加入以下组份，混匀；即用型染色液常温贮存。

二. 染色步骤：

2.1 ssDNA PAGE电泳后，凝胶用蒸馏水漂洗1-2次。

2.2 加入适量即用型染色液覆盖凝胶，一般8×10 cm凝胶50 ml即可，在摇床上常温摇动15-20分钟，摇动速度为60-70 rpm。一般2-5分钟可以看到条带。

注：染色时间不要太长，更不能过夜染色。长时间染色会导致ssDNA游离出凝胶，导致胶上无带。使用后的染色液收集后，可以重复使用2-3次，但染色灵敏度会降低。

三. 脱色步骤：

倒掉染色液，加入适量蒸馏水，在摇床上常温摇动15-20分钟，期间可以更换2-3次蒸馏水；至凝胶背景完全透明后记录图片。

● 实验示例：

1. 单链DNA染色示例：

2. 染色灵敏度示例：

凝胶：15% TBE尿素胶，1×TBE 恒压200 V 35 min

染色液配制：10 ml染色贮存液，20 ml染色缓冲液，70 ml水

染色和脱色：染色液浸泡凝胶，摇床慢摇30 min，水充分脱色

样品：取30 nt合成的单链DNA，梯度稀释如下（6个梯度）100 ng/μl，50 ng/μl，20 ng/μl，10 ng/μl，5 ng/μl，1 ng/μl，每个样品上样10 μl，泳道单链含量分别为1000 ng，500 ng，200 ng，100 ng，50 ng，10 ng，RTM509和RTM501为单链DNA Marker，上样5 μl。梯度稀释后染色结果，RTS5103染色液可以看到下限50 ng 30 nt条带。

● 常见问题：

1.  背景太深：

1.1显色时间过长。通常凝胶在染色液里2-5分钟既能看到条带，显色反应会在20分钟内结束，显色反应时间过长会蓝色背景很深。

1.2 脱色程度不够：需要更换几次蒸馏水，脱色至凝胶几乎完全没有蓝色背景。

2.  核酸条带非常浅：

上样量太少。 该染色方法可以检测到含量高于100 ng 单链DNA片段，请调整核酸上样量。

3.  染色方法适合于双链DNA染色吗？

不适合。双链DNA的分离一般用非变性DNA PAGE电泳，该染色液不能有效染色。