Tris-醋酸-SDS-PAGE电泳试剂盒（变性电泳） Ver.760558-3.0
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货号
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名称
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规格
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RTD6155
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Tris-醋酸-SDS-PAGE电泳试剂盒（变性电泳）
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10次
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● 产品组成：
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序号
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货号
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名称
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规格
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保存
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1
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RTD6154-0308
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3-8%
RealPAGE Tris醋酸预制胶
(U型板,通用型,12孔）
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10板/盒
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4℃
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2
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TA1510
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400×抗氧化剂
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15 ml
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4℃
(配制后-20℃贮存)
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3
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TA050
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10×Tris-醋酸-SDS电泳缓冲液(变性电泳,溶液型）
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500
ml
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RT
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4
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PL080-01
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5×MonoClolor蛋白上样缓冲液 (变性，还原)
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1 ml
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-20℃
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5
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RTD6202-02
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FastBlue蛋白快速染色液
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500 ml
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RT
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6
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TA5030P
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10×Tris-醋酸转膜缓冲液（湿转，粉末型）
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500
ml
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RT
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7
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说明书
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一份
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-
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● 产品简介：
Tris-醋酸-SDS-PAGE凝胶电泳适合于分离高分子量蛋白，可以有效分离50-500 kD范围内蛋白；电泳体系呈中性，抑制半胱氨酸的二次氧化，防止二硫键在凝胶中交联；在变性还原电泳中，电泳缓冲体系中加入抗氧化剂，整个电泳过程都在还原条件下进行，有效防止二硫键的形成。
本公司提供的Tris-醋酸-SDS-PAGE电泳试剂盒包含预制胶、蛋白上样、蛋白电泳、染色及转膜所需的全部试剂。试剂盒配套的预制胶为梯度凝胶，浓度为3-8%，厚度为1.1 mm，12齿，每个泳道可以上样最大30 μl样品。
本试剂盒用于蛋白变性电泳，本试剂盒可以使用10次。
● 贮存、运输及效期：
按照标签温度贮存（预制胶不能低于4℃贮存）；试剂盒常温运输；有效期1个月。
● 使用说明：
1. 实验准备：
400×抗氧化剂为干粉，常温贮存。用前加入15 ml超纯水震荡彻底溶解后使用，已经溶解的400×抗氧化剂-20℃贮存。
2. 电泳：
2.1 拆开预制胶包装，将预制胶安装在合适的电泳槽中。
注：伯乐Mini III或Mini-PROTEAN Tetra Cell，天能VE-180，六一24K系列电泳槽请确保密封条的安装方向（如图）。
六一其他系列，君意东方JY-SCZ2/4，百晶BG-verMINI等电泳槽可以直接使用预制胶。
不兼容Thermol系列电泳槽。
2.2 准备1×电泳缓冲液：
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组份
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配制量
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1000
ml
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10×Tris-醋酸-SDS电泳缓冲液
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100 ml
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超纯水
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900 ml
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2.2.1 外槽缓冲液：取适量体积1×电泳缓冲液用于外槽缓冲液。
2.2.2 内槽缓冲液：对于还原样品电泳，200 ml 1×电泳缓冲液中加0.5 ml 400×抗氧化剂，混合均匀后用于内槽缓冲液。对于非还原样品电泳，直接在内槽中加入1×电泳缓冲液，不要添加400×抗氧化剂。
2.3准备上样样品：
蛋白样品中加入 相应体积5×MonoClolor蛋白上样缓冲液（变性，还原），95℃加热处理5-10 min；对于多次跨膜蛋白（Multi-pass membrane protein）的变性电泳检测，样品建议使用37℃处理30分钟或者50℃处理10分钟，不要95℃加热5分钟，因为在95℃高温情况下，多次跨膜蛋白极易聚集形成多聚体，样品会聚集，WB检测会表现为比实际蛋白大小更大的分子量；
2.4电泳过程；
在电泳槽的内槽内加入1×电泳缓冲液(让电泳缓冲液漫过加样孔)，轻轻的拨出梳子，用1ml吸头冲洗加样孔3次；随后在电泳槽外槽加入适量的1×电泳缓冲液。上样，电泳。
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恒电压
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起始电流
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结束电流
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电泳时间
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150 V
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40-55 mA/板胶
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25-40 mA/板胶
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60+min
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注：恒压电泳时，电流是变化的，逐渐降低，参考电流变化范围
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3. 染色：
3.1 将电泳后的PAGE胶取下放入塑料容器中，加入适量FastBlue蛋白染色液（以刚刚覆盖过胶面为适），摇床常温摇动，条带5-10分钟即可见（蛋白含量高于1
μg条带）。
3.2 摇床常温继续摇动15-30分钟至条带清晰可见。
3.3 加入适量蒸馏水脱色，期间更换1-2次蒸馏水，摇床常温摇动10-15分钟至背景干净。
3.4 观察保存结果。
4. 转膜：
4.1 转印膜选择：
Tris-醋酸凝胶转膜可以使用NC膜和PVDF膜，根据蛋白大小选择膜孔径。PVDF膜使用前注意需要用甲醇润湿活化。
4.2 10×Tris-醋酸转膜缓冲液（溶液型）配制：
将10×Tris-醋酸转膜缓冲液（湿转，粉末型）粉末溶解于500 ml超纯水中，即配成500 ml 10×Tris-醋酸转膜缓冲液（溶液型），不要调节pH，pH~7.2。
4.3 准备1×转膜缓冲液：
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1×即用型转膜缓冲液 配制量 1升
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10×Tris-醋酸转膜缓冲液
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100
ml
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超纯水
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约500
ml
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＜20 kD蛋白
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无水甲醇
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20%
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SDS
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-
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20-80 kD蛋白
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无水甲醇
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10%
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SDS
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-
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＞80 kD蛋白
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无水甲醇
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10%（NC膜）/0-5%（PVDF膜）
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SDS
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0.05-0.1%
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超纯水
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定容至1升，不要调节pH，pH~7.2
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注：甲醇和SDS在转膜中有拮抗作用。甲醇使蛋白更加结合在膜上，而SDS让蛋白更加离开膜。因此对大蛋白转膜来说，多加SDS，少加甲醇；而对小蛋白转膜，多加甲醇，少加SDS。
4.4 转膜条件：
以下转膜条件仅供参考，客户针对自己的目的蛋白，最好经过1-2次预实验后，确定最佳的转膜条件。
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膜孔径
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蛋白大小
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稳流
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建议时间
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降温措施
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0.22 μm
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低于20 kD
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200 mA
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~30分钟
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不需要
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0.45 μm
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20-50 kD
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300 mA
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~45分钟
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需要
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0.45 μm
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50-200 kD
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350 mA
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~50分钟
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需要
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0.45 μm
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高于200
kD
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350 mA
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~2.5-4.5小时
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需要
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5. 实验示例：
凝胶：3-8% Tris-醋酸预制胶（RTD6154-0308）
电泳条件：1×Tris-醋酸-SDS电泳缓冲液，恒压150V 49-30 mA 65min
染色：FastBlue快速染色液（RTD6202），染色30min