10×湿转转膜缓冲液（适用于Tris醋酸胶高分子量蛋白）
10×Tank Transfer Buffer（for Tris-HAc High MW Protein）
Ver.760673-1.0
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货号
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名称
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规格
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RT5050
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10×快速湿转转膜缓冲液（适用于Tris醋酸高分子量蛋白）
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500 ml
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● 产品简介：
10×快速湿转转膜缓冲液使用独特配方，能40分钟内高效快速地将大分子量蛋白转移到印迹膜（PVDF或硝纤膜）上。产品特点：绿色环保：快速转膜液不使用甲醇，减轻了对实验者和环境的伤害。
该缓冲液经过特别优化，特别适合于Tris-醋酸胶分离大分子蛋白后的转膜。
● 贮存、效期及运输：
4-8℃贮存；有效期一年；常温运输。
● 使用说明：
1. 按照下表配制1×快速转膜液
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加入顺序
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组份
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1×快速转膜液配制量 1000 ml
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1
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10×快速转膜液
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100 ml
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2
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超纯水
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800 ml
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3
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无水乙醇
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100 ml
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2. 将滤纸和海绵浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿，平衡5分钟。
3. PVDF膜使用前要用无水甲醇润湿30秒，随后浸泡在1×快速转膜液中，完全浸湿，平衡5分钟；NC膜无需处理，直接浸泡在转膜缓冲液中。
4. 将凝胶浸泡在1×快速转膜液中。
5. 做好转印所需的三明治结构， 从负极（黑色面） 到正极（红色面或白色面） 顺序为海绵、滤纸、 凝胶、印迹膜、滤纸、海绵，然后转移至转印槽中，加入快速转膜缓冲液。
注1：要彻底清除三明治结构中的气泡，适当补加1×快速转膜液保持三明治结构湿润。
注2：三明治结构的制作不能太紧，也不能太松。太紧和太松都会影响转印效果。
6.推荐使用恒流转移：
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凝胶厚度
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恒流
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凝胶浓度
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推荐转膜时间
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1.0 mm
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400
mA
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3-8%Tris醋酸胶
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~40 min
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● 实验示例：
图1 图2 图3
样品1：K562-IP-TP提取样品：K562 细胞用Western及IP细胞裂解液（WL1020）提取总蛋白；
样品2：Jurkat-RIPA-TP提取样品：Jurkat细胞用RIPA裂解液（强）（RL1020）提取总蛋白；
样品处理：5×双色蛋白上样缓冲液 (变性，还原）（PL090），95度
5 min，样品1和2上样20
μg；
Marker：三色预染高分子量蛋白Marker III(25-400 kD)（RTD6151），ECL发光Marker
II（22-154 kD）(RTD6129)，彩虹预染宽分子量蛋白Marker（10-260
kD）（RTD6106），上样各5 μl；
电泳：3-8% RealPAGE Tris-醋酸预制胶(RTD6154), 1×Tris-醋酸-SDS电泳缓冲液（加抗氧化剂）（TA050），恒压150 V
51-44 mA 70 min(图1)；
转膜：1×快速湿转转膜缓冲液（RT5050）加10%乙醇；0.45
μm PVDF膜； 恒流400
mA 40 min 84-88 V，全程冰浴搅拌转膜（图2）；
封闭：Western封闭液I（BSA）（WB1070）
RT 60 min；
抗体：p-ACC兔单抗
CST#3661S 1：1000 4℃过夜孵育；二抗-Jackson羊抗兔IgG-HRP 1:5000 RT 60 min；
ECL发光检测（图3）：K562 p-ACC 检测分子量~250 kD，Jurkat未检测到。